UltraTrans 3000 Transfection Reagent #T1001
UltraTrans 3000 细胞转染试剂具有转染效率高，细胞毒性低，操作简便，适用细胞范围广等特点。
试剂组分
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产品名称 |
存储条件 |
保质期 |
功能 |
|
UltraTrans 3000 Transfection Reagent |
4°C保存，避免冷冻 |
见管壁 |
协助DNA进入细胞核，完成基因表达 |
运输条件： 4°C运输
表1：不同培养皿所需转染质粒的剂量及培养面积
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培养板/皿/瓶 |
培养面积 |
DNA (μg) |
UltraTrans 3000 (μL) |
稀释体积 (μL) |
培养液体积（mL） |
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96孔板 |
0.33 cm2 |
0.17 |
0.51 |
2 x 6.8 |
0.1 |
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48孔板 |
1cm2 |
0.5 |
1.5 |
2 × 20 |
0.3 |
|
24孔板 |
2 cm2 |
1 |
3 |
2 × 40 |
0.6 |
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12孔板 |
4 cm2 |
2 |
6 |
2 × 80 |
1.2 |
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6孔板 |
9 cm2 |
3 |
9 |
2 × 120 |
2 |
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35 mm 培养皿 |
9 cm2 |
3 |
9 |
2 × 120 |
2 |
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60 mm 培养皿 |
22 cm2 |
6 |
18 |
2 × 240 |
4 |
|
100 mm 培养皿 |
60 cm2 |
12 |
36 |
2 × 360 |
10 |
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150 mm 培养皿 |
150 cm2 |
25 |
75 |
2 x 1000 |
25 |
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T25 培养瓶 |
25 cm2 |
8 |
24 |
2 x 320 |
5 |
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T75 培养瓶 |
75 cm2 |
24 |
72 |
2 x 960 |
15 |
使用方法
一、细胞准备
贴壁转染法：转染前18-24 小时进行细胞铺板（培养基不含抗生素），使其在转染时的密度大约在70%-80%左右。
悬浮转染法：转染前，将细胞消化成单细胞悬液后，铺到培养板中，密度为70%-80%。细胞密度根据细胞培养皿底面积进行计算。
二、配置UltraTrans 3000和DNA复合物 （以24孔板的单孔为例）
(1) 将1 μg质粒DNA稀释到40 μLOpti-MEM培养基或者无血清的DMEM培养基，混匀。
(2) 将3 μL UltraTrans 3000转染试剂稀释到40 μLOpti-MEM培养基或者无血清的DMEM培养基，混匀。
(3) 将稀释好的UltraTrans 3000转染试剂立即加入到已稀释好的质粒DNA中，轻轻混匀。
(4) 室温放置10-15 min，以形成UltraTrans 3000-DNA复合物。
三、转染细胞
(1) 将混合好的80 μL UltraTrans 3000-DNA复合物均匀滴入到含细胞的培养板中，轻轻晃动培养皿，让UltraTrans 3000-DNA复合物分散均匀。
(2) 在37℃，5% CO2培养箱培养6-18 h，去除含UltraTrans 3000-DNA复合物的培养液，更换新的培养液（此刻可以添加抗生素）。
注意事项：
- 培养液中的血清不影响转染效率。
- 转染试剂使用量受细胞类型及其他实验条件影响，建议初次使用时设置梯度进行优化最佳使用量。
- 抗生素会显著降低细胞转染效率，换液后可以添加抗生素。
适用细胞
HEK293T， A549， HeLa，HepG2，KYSE450，LLC等多种细胞系
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