EasyIso™ 小鼠naive CD4 T细胞分离试剂盒 #SN4104

本试剂盒采用阴选的方式，通过无柱磁极分离小鼠脾脏中的naïve CD4 T细胞。分离过程中抗体和磁珠不会接触naïve CD4 T细胞，能够最大限度保持T细胞最原始的状态。
操作简便
无需裂红
纯度最高可达99%
18-20分钟完成分离
试剂盒通过生物素偶联的抗体标记非naïve CD4 T细胞，再将细胞和链霉亲和素纳米磁珠孵育偶联，然后通过磁极进行无柱分离。目标细胞只需倒入一个新的管中即可完成分离，分离后的细胞可立即用于后续应用，如流式细胞术、细胞培养和功能实验等。

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产品详情

试剂盒组分

产品名称	存储条件	缓冲液成分	功能
EasyIso^TMMouse CD16/CD32 Blocker	4°C保存，避免冷冻	PBS, 0.1% BSA	封闭FcR受体，降低抗体非特异性结合
EasyIso^TM Mouse CD4 T cell Isolation Cocktail	4°C保存，避免冷冻	PBS, 0.1% BSA	识别非CD4 T细胞抗体混合液，标记非目的细胞
EasyIso^TM Mouse Memory T Cell Depletion Cocktail	4°C保存，避免冷冻	PBS, 0.1% BSA	去除记忆T细胞
EasyIso^TM Streptavidin Nanobeads	4°C保存，避免冷冻	PBS, 0.1% BSA	磁珠结合非CD4 T细胞，通过磁极去除

BSA - bovine serum albumin; PBS - phosphate-buffered saline

运输条件： 4°C运输

设备和试剂要求

缓冲液：FACS Buffer (1 x PBS+0.02% EDTA+2% FBS)
耗材：70 μm无菌尼龙滤网；无菌离心管
仪器：离心机，磁力架

温馨提示

脾脏样本无需裂红处理
采用FACS Buffer而不是PBS进行操作，能够提高细胞得率
确保FACS Buffer渗透压稳定，免疫细胞较为敏感
确保每一步无菌操作，谨防污染

操作步骤

步骤	说明	剂量和时间
1	准备脾脏单细胞悬液至指定浓度	1 x 10^8 cells/mL
2	加入EasyIso^TMMouse CD16/CD32 Blocker	100 μL/mL
3	加入EasyIso^TM Mouse CD4 T cell Isolation Cocktail至样品中	100 μL/mL
4	抗体和细胞孵育	常温孵育7.5 min
5	加入EasyIso^TM Mouse Memory T Cell Depletion Cocktail	100 μL/mL
6	抗体和细胞孵育	常温孵育2.5 min
7	震荡混匀 Streptavidin Nanobeads	混匀30 s
8	加Streptavidin Nanobeads至样品中	100 μL/mL
9	轻柔混匀磁珠和细胞，孵育	常温孵育5 min
10	加入FACS Buffer到样品中，轻轻混匀	总体积加入至2.5 mL （5 mL流式管）总体积加入至 7.5 mL (15 mL离心管)
11	样品置于磁力架上，使磁珠吸附	单孔磁力架吸附（3 min）联排磁力架吸附（5 min）
12	倾斜磁力架，将样品倒入新的收集管中，收集样品	细胞分离成功

数据展示

如图：小鼠脾脏naïve CD4 T 细胞的分离。（A）分离C57BL/6背景小鼠的脾脏，磨碎后采用70 μm无菌尼龙滤网过滤后，进行CD3、CD4、CD62L和CD44染色，在CD4细胞群中，naïve CD4 细胞（CD62L+CD44-）比例约39.3%。（B）采用（#SN4104）分离Naïve CD4 T细胞后，分选后的CD4 T细胞纯度高达94.3%。