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EasyIso™ 小鼠CD3 T细胞分离试剂盒 #SN4101

本试剂盒采用阴选的方式,通过无柱磁极分离小鼠脾脏中的CD3 T细胞。分离过程中抗体和磁珠不会接触CD3 T细胞,能够最大限度保持T细胞最原始的状态。
• 操作简便
• 无需裂红
• 纯度最高可达99%
• 18-20分钟完成分离
试剂盒通过生物素偶联的抗体标记非CD3 T细胞,再将细胞和链霉亲和素纳米磁珠孵育偶联,然后通过磁极进行无柱分离。目标细胞只需倒入一个新的管中即可完成分离,分离后的细胞可立即用于后续应用,如流式细胞术、细胞培养和功能实验等。
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产品详情

试剂盒组分

产品名称

存储条件

缓冲液成分

功能

EasyIso™  Mouse CD3 T cell Isolation Cocktail

4°C保存,避免冷冻

PBS, 0.1% BSA

识别非CD3 T细胞抗体混合液,标记非目的细胞

EasyIso™  Streptavidin Nanobeads

4°C保存,避免冷冻

PBS, 0.1% BSA

磁珠结合非CD3 T细胞,通过磁极去除

 

BSA - bovine serum albumin; PBS - phosphate-buffered saline

运输条件: 4°C运输

 

设备和试剂要求

  • 缓冲液:FACS Buffer (1 x PBS+0.02% EDTA+2% FBS)
  • 耗材:70 μm无菌尼龙滤网;无菌离心管
  • 仪器:离心机,磁力架

 

温馨提示

  • 脾脏样本无需裂红处理
  • 采用FACS Buffer而不是PBS进行操作,能够提高细胞得率
  • 确保FACS Buffer渗透压稳定,免疫细胞较为敏感
  • 确保每一步无菌操作,谨防污染

 

操作步骤

 

步骤

说明

剂量和时间

1

准备脾脏单细胞悬液至指定浓度

1 x 10^8 cells/mL

2

加入EasyIso™  Mouse CD3 T cell Isolation Cocktail至样品中

100 μL/mL

3

抗体和细胞孵育

常温孵育10 min

4

震荡混匀 Streptavidin Nanobeads

混匀30 s

5

加Streptavidin Nanobeads至样品中

100 μL/mL

6

轻柔混匀磁珠和细胞,孵育

常温孵育5 min

7

加入FACS Buffer到样品中,轻轻混匀

  总体积加入至2.5 mL (5 mL流式管)

总体积加入至 7.5 mL (15 mL离心管)

8

样品置于磁力架上,使磁珠吸附

单孔磁力架吸附(3 min)

联排磁力架吸附(5 min)

9

倾斜磁力架,将样品倒入新的收集管中,收集样品

细胞分离成功

 

 

  数据展示

 

 

如图:小鼠脾脏CD3 T 细胞的分离。(A)分离C57BL/6背景小鼠的脾脏,磨碎后采用70 μm无菌尼龙滤网过滤后,进行CD45和CD3染色,CD3比例约33%。(B)采用(#SN4101)分离CD3 T细胞,分选后的CD3 T细胞纯度高达98.7%。