EasyIso™ 小鼠B细胞分离试剂盒 #SN4001
• 操作简便
• 无需烈红
• 纯度最高可达99%
• 18-20分钟完成分离
试剂盒通过生物素偶联的抗体标记非B细胞，再将细胞和链霉亲和素纳米磁珠孵育偶联，然后通过磁极进行无柱分离。目标细胞只需倒入一个新的管中即可分离，分离后的细胞可立即用于后续应用，如流式细胞术、细胞培养和功能实验等。
试剂盒组分
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产品名称 |
存储条件 |
缓冲液成分 |
功能 |
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EasyIso ™ Mouse CD16/CD32 Blocker |
4°C保存，避免冷冻 |
PBS, 0.1% BSA |
封闭FcR受体，降低抗体非特异性结合 |
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EasyIso ™ Mouse B Cell Isolation Cocktail |
4°C保存，避免冷冻 |
PBS, 0.1% BSA |
识别非 B细胞抗体混合液，标记非目的细胞 |
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EasyIso ™ Streptavidin Nanobeads |
4°C保存，避免冷冻 |
PBS, 0.1% BSA |
磁珠结合非 B细胞，通过磁极去除 |
BSA - bovine serum albumin; PBS - phosphate-buffered saline
运输条件： 4°C运输
设备和试剂要求
- 缓冲液：FACS Buffer (1 x PBS+0.02% EDTA+2% FBS)
- 耗材：70 μm无菌尼龙滤网；无菌离心管
- 仪器：离心机，磁力架
温馨提示
- 小鼠脾脏研磨后采用70 μm无菌尼龙滤网过滤即可用于分离，无需采用红细胞裂解液
- 采用FACS Buffer而不是PBS进行操作，能够提高细胞得率
- 确保FACS Buffer渗透压稳定，免疫细胞较为敏感
- 确保每一步无菌操作，谨防污染
操作步骤
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步骤 |
说明 |
剂量和时间 |
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1 |
准备脾脏单细胞悬液至指定浓度 |
1 x 10^8 cells/mL |
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2 |
加入EasyIso ™ Mouse CD16/CD32 Blocker |
100 μL/mL |
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3 |
加入EasyIso™ Mouse B Cell Isolation Cocktail至样品中 |
100 μL/mL |
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4 |
抗体和细胞孵育 |
常温孵育10 min |
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5 |
震荡混匀 Streptavidin Nanobeads |
混匀30 s |
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6 |
加Streptavidin Nanobeads至样品中 |
100 μL/mL |
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7 |
轻柔混匀磁珠和细胞，孵育 |
常温孵育5 min |
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8 |
加入FACS Buffer到样品中，轻轻混匀 |
总体积加入至2.5 mL （5 mL流式管） 总体积加入至 7.5 mL (15 mL离心管) |
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9 |
样品置于磁力架上，使磁珠吸附 |
单孔磁力架吸附（3 min） 联排磁力架吸附（5 min） |
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10 |
倾斜磁力架，将样品倒入新的收集管中，收集样品 |
细胞分离成功 |
数据
如图：小鼠脾脏 B 细胞的分离。（A）分离C57BL/6背景小鼠的脾脏，磨碎后采用70 μm无菌尼龙滤网过滤后，进行CD45和CD19染色，CD45+CD19+比例约23%。（B）采用（#SN4001）分离B细胞，分选后的CD45+CD19+细胞纯度高达95.7%。
