ActBeads™ 小鼠CD3/CD28激活磁珠 #AM2001
• ActBeads™ 激活磁珠浓度为4x107个/mL。
• 磁珠粒径均一，流式细胞仪分析时可与T细胞明显区分
试剂盒组分
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产品名称 |
存储条件 |
缓冲液成分 |
功能 |
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ActBeads™ Mouse CD3/CD28 Activator |
4°C保存，避免冷冻 |
PBS, 0.1% BSA |
通过磁珠偶联的CD3/CD28抗体激活T细胞，促进T细胞增值和分化 |
BSA - bovine serum albumin; PBS - phosphate-buffered saline
运输条件： 4°C运输
培养条件
- 缓冲液：RPMI1640 培养基+10% FBS + 2 mM L-Glutamine+100 U/mL penicillin/streptomycin
- 细胞因子：人或者小鼠的IL2
温馨提示
- hIL2在人和小鼠细胞中具有同等活力
- 小鼠T细胞分离时，确保FACS Buffer渗透压稳定，小鼠免疫细胞非常敏感
- IL7、IL15可与IL2联合使用，促进T细胞增值
激活或者扩增小鼠T细胞
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步骤 |
说明 |
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1 |
分离小鼠T细胞，将其铺到96孔平底板中，细胞密度为8 x 104/孔，培养基200 μL |
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2 |
ActBeads™ 小鼠CD3/CD28激活磁珠震荡混匀后，加入到细胞中，2 μL/孔 Note: 激活T细胞时，ActBeads TM和细胞比例为1:1；诱导Treg细胞分化时，磁珠和细胞的比例应增加到2:1 |
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3 |
加入IL2细胞因子，终浓度为100 U/mL |
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4 |
二氧化碳细胞培养箱进行T细胞培养，5% 二氧化碳，37℃ |
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5 |
培养48-72小时后，T细胞体积变大，形态多样 |
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6 |
当细胞密度较高时，更换新鲜培养基或者将细胞转移至新的培养板 |
T细胞重新刺激
通常T细胞在扩增到第7-10天时，需要通过添加新鲜的ActBeads TM和IL-2进行多次重新刺激。经过反复重新刺激后，CD8+ T细胞仍保持细胞毒性。
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步骤 |
说明 |
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1 |
将T细胞重悬后置于无菌离心管中，在磁力架上吸附2分钟 |
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2 |
倒出/吸出T细胞，进行细胞计数 |
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3 |
将T细胞重新铺到培养板中，密度0.5–1 × 106 cells/mL |
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4 |
二氧化碳细胞培养箱培养，5% 二氧化碳，37℃ |
数据展示：
如图：采用Immuno-X™系列产品分离小鼠脾脏中的CD3 T 细胞并进行体外培养。脾脏细胞采用Cell Proliferation Dye eFluor™ 450荧光染料进行荧光标记，然后采用（#SN4101）分离脾脏中CD3 T细胞，加入ActBeads™ 小鼠CD3/CD28激活磁珠 和100 U/mL的rhIL2。3天后，流式细胞仪分析T细胞的eFluor™ 450荧光信号。
